在化學中，分光光度法是定量測量材料的反射或透射特性作為波長的函數(shù)。它比通用術(shù)語電磁光譜更具體，因為分光光度法處理可見光、近紫外和近紅外，但不包括時間分辨光譜技術(shù)。

　　分光光度法使用光度計，稱為分光光度計，它可以測量光束的強度作為其顏色(波長)的函數(shù)。分光光度計的重要特征是光譜帶寬(它可以通過測試樣品透射的顏色范圍)、樣品透射百分比、樣品吸收的對數(shù)范圍，有時還有反射率測量的百分比。

　　分光光度計通常用于測量溶液、透明或不透明固體(如拋光玻璃)或氣體的透射率或反射率。盡管許多生化物質(zhì)是有色的，例如它們吸收可見光，因此可以通過比色程序進行測量，但即使是無色的生化物質(zhì)通常也可以轉(zhuǎn)化為適合顯色成色反應的有色化合物，從而產(chǎn)生適合比色分析的化合物。然而，它們也可以設(shè)計為使用不同的控制和校準來測量通常覆蓋約200nm至2500nm 的任何列出的光范圍的擴散率。在這些光范圍內(nèi)，需要使用根據(jù)光度測定波長而不同類型的標準在機器上進行校準。

　　使用分光光度法的實驗的一個例子是確定溶液的平衡常數(shù)。溶液中的某種化學反應可以正向和反向發(fā)生，其中反應物形成產(chǎn)物，產(chǎn)物分解成反應物。在某個時刻，這種化學反應會達到一個平衡點，稱為平衡點。為了確定此時反應物和產(chǎn)物的各自濃度，可以使用分光光度法測試溶液的透光率。通過溶液的光量表示不允許光通過的某些化學物質(zhì)的濃度。

　　光的吸收是由于光與分子的電子和振動模式的相互作用。每種類型的分子都有一組與其化學鍵和原子核的組成相關(guān)的單獨的能級，因此會吸收特定波長或能量的光，從而產(chǎn)生獨特的光譜特性。這是基于其特定和獨特的構(gòu)成。

　　分光光度計的使用跨越多個科學領(lǐng)域，如物理學、材料科學、化學、生物化學和分子生物學。它們廣泛用于許多行業(yè)，包括半導體、激光和光學制造、印刷和法醫(yī)檢驗，以及用于研究化學物質(zhì)的實驗室。分光光度法通常用于測量酶活性、確定蛋白質(zhì)濃度、確定酶動力學常數(shù)和測量配體結(jié)合反應。最終，分光光度計能夠根據(jù)控制或校準來確定目標中存在哪些物質(zhì)，以及通過計算觀察到的波長來準確確定物質(zhì)的含量。