紫外可見分光光度計(jì)通過比較穿過樣品的光束強(qiáng)度與未放置樣品的參考光束的強(qiáng)度來提供定量測(cè)量。樣品的濃度越高，它吸收的光就越多，因此高濃度測(cè)量對(duì)應(yīng)于高吸光度值。然而，在高吸光度下，實(shí)際上很少有光到達(dá)儀器檢測(cè)器，對(duì)于許多市售的不同分光光度計(jì)來說，對(duì)這些非常低的信號(hào)水平進(jìn)行準(zhǔn)確的線性測(cè)量是非常具有挑戰(zhàn)性的。如果極低光照水平的測(cè)量不是線性的，那么儀器的高吸光度值測(cè)量將不準(zhǔn)確，不能用于可靠的定量測(cè)量。

　　吸光度和線性

　　根據(jù) Beer-Lambert 定律，吸光度 (Abs) 是樣品濃度的線性函數(shù)。盡管分光光度計(jì)實(shí)際上測(cè)量的是光的透射率。對(duì)于只有非常少量的光到達(dá)檢測(cè)器的高吸光度測(cè)量，任何影響這些低水平測(cè)量的儀器效應(yīng)都會(huì)對(duì)測(cè)量的線性度產(chǎn)生重大影響。雖然大多數(shù)分光光度計(jì)指定的可測(cè)量吸光度范圍在 0 - 4 Abs 之間，但儀器光學(xué)器件的質(zhì)量決定了低光水平下的實(shí)際性能。最重要的考慮因素是雜散光和噪聲的貢獻(xiàn)。

　　雜散光

　　雜散光是從單色儀到達(dá)檢測(cè)器的任何不直接來自測(cè)量光束的光，它會(huì)影響測(cè)量的透射光，如下所示：

　　中檔儀器的典型雜散光系數(shù)約為 0.05%T，而高端儀器在單色儀版本中的雜散光貢獻(xiàn)率約為 0.015%T。然而，具有兩個(gè)單色器的研究級(jí)儀器可提供最佳的線性吸光度范圍，雜散光低至 0.00025%T。

　　對(duì)于中檔儀器，在 3 Abs 范圍內(nèi)由雜散光引起的誤差非常顯著，并且在 4 Abs 時(shí)要高得多，這意味著定量測(cè)量應(yīng)限制在 2 Abs 及以下。對(duì)于單色儀儀器，3 Abs 處的誤差更小，這意味著它可以用于直到該點(diǎn)的定量測(cè)量，但不能達(dá)到 4 Abs。然而，在雙單色器版本中，誤差可以忽略不計(jì)，直至 4 Abs。

　　噪音

　　信噪比對(duì)于確定分光光度計(jì)的靈敏度至關(guān)重要。檢測(cè)系統(tǒng)內(nèi)的峰間噪聲會(huì)影響非常小信號(hào)水平的測(cè)量精度，即高吸光度。系統(tǒng)的光學(xué)設(shè)計(jì)越好，能量吞吐量就越好，這反過來又可以提供非常低的噪聲測(cè)量。噪聲被引用為峰峰值或 RMS 值。RMS 對(duì)峰峰值有平滑作用，給出明顯更低的噪聲值。然而，直接影響低信號(hào)電平測(cè)量的是峰間噪聲，因此峰間噪聲是應(yīng)始終考慮的值。噪聲值的典型示例是零吸光度時(shí)的 0.0003A 峰間值，但對(duì)于頂級(jí)儀器，噪聲測(cè)量值為 0。